液相色谱柱样品的前处理及流动相流速的选择
湖南弘林科学仪器有限公司 / 2023-02-20
在使用实验室设备色谱柱之前,最好对色谱柱的性能进行测试,并将结果保存下来,作为日后评估色谱柱性能变化的参考。但需要注意的是,由于样品、流动相、柱温等条件的不同,色谱柱性能可能会有所不同;另外,色谱柱性能测试是按照色谱柱出厂报告中的条件进行的(出厂测试中使用的条件是最好的),只有这样,测得的结果才具有可比性。
1.样品预处理:
1)最好用流动相溶解样品。
2)用预处理柱去除样品中强极性或柱填料不可逆吸附的杂质。
3)用0.45μm滤膜去除颗粒杂质。
2.流动相的制备:
液相色谱是通过柱填料和流动相之间的质量交换实现样品组分的分离,因此要求流动相具有以下特性:
1)流动相相对于样品有一定的溶解度,以保证样品成分不会在柱内沉淀(或长时间留在柱内)。
2)流动相是惰性的,不与样品发生反应(特殊情况除外)。
3)流动相的粘度应尽可能小,这样在使用长分析柱时才能获得良好的分离效果;同时可以降低色谱柱的压降,延长液泵的使用寿命(提高温度可以降低流动相的粘度)。
4)流动相的物理和化学性质应适合所用的检测器。如果使用紫外检测器,最好使用低紫外吸收的溶剂。
5)流动相的沸点不能太低,否则容易产生气泡,使实验无法进行。
6)流动相配好后,必须脱气。除去溶解在流动相中的微量气体不仅有利于检测,而且可以防止流动相中的微量氧与样品相互作用。
3.流动相流速的选择:
因为柱效是柱中流动相的线速度的函数,所以通过使用不同的速度可以获得不同的柱效。对于特定的色谱柱,为了追求最佳的柱效,最好使用最佳的流速。内径为4.6mm的色谱柱,流速一般为1ml/min,内径为4.0mm的色谱柱,流速为0.8ml/min。
当选择最佳流速时,分析时间可能会延长。可采用改变流动相洗涤强度的方法来缩短分析时间(如使用反相柱时可适当增加甲醇或乙腈的含量)。