怎样保证试验样品的可重复性、均一性?
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biofuture全自动核酸提取仪ME320特点:
速度快、通量高、灵敏度高、重复性好,提高自动化,减少人为误差----减少人控环节及人控影响因素
ME320技术中应用的磁珠
内核:铁氧体
内核表面:覆盖高分子惰性材料
表面标记和处理:不同材料
New TiO2:磷酸化多肽富集磁珠
硅质:用于核酸的纯化
IMAC和GSH磁珠:纯化GST蛋白
TALON、Ni磁珠:纯化His蛋白
Protein A和G:纯化IgG
反相RPC和WCE:纯化多肽片段
特异性抗体:分离蛋白和细胞
ChargeSwitch磁珠:类似离子交换磁珠,纯化核酸
可以自己标记磁珠的表面:标记研究者自己的抗体
传统离心纯化法
A.直接离心沉淀DNA |
B.介质离心沉淀DNA |
C.介质离心结合DNA |
酚抽提,酒精沉淀 ☺处理量大,回收率高 ☹核酸沉降慢,离心时间长 |
介质(如玻璃珠)辅助离心 ☺处理量大,沉降快离心短 ☹回收率略低 |
离心柱法 ☺速度快,操作简单 ☹结合力弱,回收率低 |
ME320提取核酸原理
应用磁珠纯化技术,可以利用磁铁特异吸附核酸,省去离心操作,摆脱了离心机限制,不仅节省时间,同时使高通量纯化成为可能。
转移磁珠代替转移溶液
1、减少人工误差,提高重复性;2、避免吸液放液操作较少交叉污染;
3、实现快速高通量操作;4、磁珠的高结合能力和转移效率提高检测灵敏度。
转移液体 |
转移磁珠 |
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两种磁珠纯化法的比较 |
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转移液体的磁珠纯化法 |
转移磁珠的磁珠纯化法 |
转移液体 |
需要转移液体,可能漏液,造成交叉污染 |
无需转移液体,无交叉污染 |
速度 |
吸排液体+外侧吸附磁珠或离心,体耗时较长 |
仅需内侧吸附磁珠,节省时间 |
回收率 |
磁珠沉降慢,吸液时有磁珠损耗 |
内部磁棒吸附,磁珠回收高,几乎无残留 |
液体残留 |
吸液不充分,有液体残留,难以控制残留量 |
无需吸液,直接高效率转移磁珠,几乎无残液 |
操作成本 |
需移液器,消耗吸头、微孔板or离心管、试剂 |
无需移液器,消耗微孔板、试剂 |
ME320“简单”
ME320节省时间
纯化32个样品,用ME320 可以节省60分钟
用 ME320 纯化的和用Qiagen QIAamp 纯化的DNA 的质量相当
高均一性、重复性
适用于中小样品通量,体积小,灵活方便,操作简单